上海恒遠(yuǎn)告訴大家：植物脫水蛋白（dehydrin）試劑盒操作步驟
更新時(shí)間：2012-06-13 點(diǎn)擊次數(shù)：2201
植物（dehydrin）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍： 96T
3.0pg/ml-80pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中脫水蛋白（dehydrin）含量。
實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物脫水蛋白（dehydrin）水平。用純化的植物
脫水蛋白（dehydrin）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脫水
蛋白（dehydrin），再與HRP 標(biāo)記的脫水蛋白（dehydrin）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗
體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脫水蛋白（dehydrin）呈正相關(guān)。用
酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物脫水蛋白
（dehydrin）濃度。
試劑盒組成 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（160pg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說(shuō)明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步 操作步 操作步 操作步驟 驟驟 驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
80pg/ml 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40pg/ml 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20pg/ml 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10pg/ml 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.0pg/ml 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然后再加待測(cè)樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié) 操作程序總結(jié) 操作程序總結(jié) 操作程序總結(jié)： ：： ：
計(jì)算 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng) 注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存。
7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月
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